1. 글루텐 분해 유산균의 생화학적 특성 분석
가. 글루텐 분해 유산균의 내산성 평가
글루텐 분해 유산균의 pH 2부터 pH 10까지 조정된 MRS배지에서의 내성을 평가하였고, 그림 1의 결과를 얻었다. 본 실험에서 사용된 글루텐 분해 유산균은 pH 3.0에서 2시간 경과시 84% 의 높은 생존율을 나타내고 있었으며, pH 2.0에서는 사멸하는 것으로 확인하였다.
이는 유사한 연구 보고와 같이 우수한 내산성을 가짐으로써 향후 식품 산업에 활용 가능성이 우수하다고 할 수 있다.
그림 1. 글루텐 분해 유산균의 내산성 평가
나. 글루텐 분해 유산균의 내담즙성 평가
글루텐 분해 유산균의 내담즙성을 평가하였고 결과는 그림 2에 나타내었다. 미생물이 생존한 상 태로 장관에 도달하려면 췌장에서 십이지장으로 분비 되는 담즙에 대한 내성이 있어야 하며 유산균이 probiotics로서의 기능을 발휘하기 위해서는 oxgall이 0.3% 함유된 배지에서 성장할 수 있을 정도의 내성을 갖고 있어야 한다 (Gilliland 등, 1984).
담즙산을 각각 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1.0% 첨가한 MRS 액체배지에 글루텐 분해 유산균의 내담즙성 실험을 실시한 결과, 1.0% 에도 균이 자라는 것을 볼 수 있었다.
유산균이 probiotics로서의 기능을 수행하려면 oxgall이 0.3% 함유된 배지에서 성장할 수 있을 정도의 내성을 가지고 있어야 한다는 Gilliland 등의 보고와 비교시 본 실험에 사용한 글루텐 분해 유산균의 경우 담즙에 대하여 매우 강한 내성을 지고 있다.
그림 2. 글루텐 분해 유산균의 내담즙성 평가
다. 글루텐 분해 유산균의 내열성 평가 글루텐 분해 유산균의 열에 대한 안정성을 조사하기위해 MRS broth에서 배양한 배양액을 40℃ 부터 10℃ 격으로 50℃까지 2시간 열처리 후 생균수 및 내열성을 확인하였다 (그림 3 ). 일반적으로 Bifidobacterium sp. 의 경우 50℃ 이상의 온도에서는 열 안정성이 감소하는 것으 로 알려져 있으며, Mario(2006)의 연구에 의하면 Streptococcus sp.의 경우엔 50℃이상의 온도에 열처리했을 때 안정한 것으로 알려져 있다. 글루텐 분해 유산균은 40℃에서 생존율이 7%로 감소되는 모습을 보였고, 50℃ 이상의 온도에서는 사멸하는 것을 확인 하였다. 그림 3. 글루텐 분해 유산균의 내열성 평가
라. 병원성 미생물에 대한 항균활성
본 연구에서 8종의 병원성 미생물에 대한 글루텐 분해 유산균의 항균활성을 평가하였으며, 8종의 병원성균(E.coli, S.aureus, E.rhapontic, S.epidermidis, Listera, Sh.flexneri, Sh.sonnei, B.creus)에서 모두 clear zone이 형성 되었다.
특히 E. rhapontici와 B. cereus는 10mm의 저해환이 생성되어 높은 항균활성을 갖는 것을 확인하였다. S. epidermidis는 가장 적은 저해 환을 나타내었으며 나머지는 5 mm 이상의 저해환을 생성되어 항균활성을 갖는 것을 확인하였다.
2. 글루텐 분해 유산균 동물 실험
가. 실험방법
1) C57BL/6 마우스는 1921년 C.C. Little이 C57BR과 C57L을 발전시킨 Miss Abby Lathrop's stock을 교배시켜 개발한 모델임. 자연발생 종양이 적게 발생하며 사람의 소화기관과 유사한 단위동물 특징이 있어 본 연구의 동물모델로 선택함.
2) 총 60수의 4주령 C57BL/6 수컷 마우스를 임의적으로 그룹 배치한 후 일주일동안 순화기간을 거침
3) Gluten noodle과 gluten-free noodle은 동결건조하여 파우더 형태로 만든 후 사료에 배합 제조함.
그룹 | UT | 대조구 | 글루텐 프리 밀가루 | ||
저농도 | 중농도 | 고농도 | |||
% kcal from fat | 18 | 18 | 18 | 18 | 18 |
% kcal from wheat | - | 60 | 60 | 60 | 60 |
글루텐 면 (%, w/w) | - | 30 | 27 | 18 | 0 |
글루텐 프리 면 (%. w/w) | - | 0 | 3 | 12 | 30 |
동물(마우스)의 수 | 12 | 12 | 12 | 12 | 12 |
성별 | 수컷 | 수컷 | 수컷 | 수컷 | 수컷 |
급이 기간(주) | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 |
표 1. 동물실험의 설계
1) 일반사료(UT; untreated)
2) 일반사료 + 일반 밀가루 30%(w/w) (CTL; control, 음성대조군)
3) 일반사료 + 일반 밀가루 27% + 글루텐 프리 밀가루 3%(저농도)
4) 일반사료 + 일반 밀가루 18% + 글루텐 프리 밀가루 12%(중농도)
5) 일반사료 + 글루텐 분해 밀가루 30%(고농도)
나. 실험결과
1) 혈중 가스트린을 상업용 진단 키트를 사용하여 측정함(그림 4). 가스트린은 위전정부 G 세포에서 분비되는 호르몬으로 위액 분비를 촉진 시키고, 위장 운동에 도움을 줌.
그림 4. 글루텐-프리 밀가루 급여에 따른 혈중 가스트린 (**p<0.01)
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